熒光偏振的應(yīng)用

                             熒光偏振的應(yīng)用

   熒光偏振應(yīng)用的領(lǐng)域很多,就先舉2個(gè)例子吧.
   熒光偏振**技術(shù)（Fluorescence Polarization Immunassay）——這是一項(xiàng)相對(duì)較為成熟的技術(shù)。它利用熒光偏振原理，采用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合法機(jī)制，常用來監(jiān)測(cè)小分子物質(zhì)如**、**在樣本中的含量。以**檢測(cè)為例，以熒光素標(biāo)記的**和含待測(cè)**的樣本為抗原，與一定量的抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。熒光標(biāo)記的**在環(huán)境中旋轉(zhuǎn)時(shí)，偏振熒光的強(qiáng)度與其受激發(fā)時(shí)分子轉(zhuǎn)動(dòng)的速度成反比。大分子物質(zhì)旋轉(zhuǎn)慢，發(fā)出的偏振熒光強(qiáng)；小分子物質(zhì)旋轉(zhuǎn)快，其偏振熒光弱（去偏振現(xiàn)象）。因此，在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合過程中，樣本中待測(cè)**越多，與抗體結(jié)合的標(biāo)志抗原就越少，抗原抗體復(fù)合物體積越大，旋轉(zhuǎn)速率越慢，從而激發(fā)的熒光偏振光度也就越少。當(dāng)我們知道了已知濃度的標(biāo)記抗原與熒光偏振光性的關(guān)系后就可以測(cè)量未知濃度的物質(zhì)。因此，這項(xiàng)技術(shù)可用來檢測(cè)環(huán)境或食品樣品中有毒物質(zhì)如農(nóng)藥的殘留量。
此外，臨床醫(yī)學(xué)診斷也在廣泛采用熒光偏振。除應(yīng)用上述方法可測(cè)定人體體液樣本中某一特定物質(zhì)的含量外，也可直接應(yīng)用于臨床診斷。例如，由Cercek等開發(fā)的惡性腫瘤診斷方法中提出，進(jìn)入**細(xì)胞的熒光物質(zhì)，受胞漿濃度有序性的干擾，其運(yùn)動(dòng)方向和速率會(huì)發(fā)生變化。胞漿粘度高時(shí)，熒光物質(zhì)運(yùn)動(dòng)變慢，受偏振光激發(fā)產(chǎn)生的激發(fā)光與胞漿粘度低時(shí)產(chǎn)生的激發(fā)光性質(zhì)不同。通過追蹤測(cè)定激發(fā)的偏振光性質(zhì)，即可了解**細(xì)胞的胞漿流動(dòng)性、粘度等環(huán)境的變化，結(jié)合其它輔助診斷方法，可有助于癌癥的早期診斷。利用熒光偏振，還可檢測(cè)病人樣本中病毒DNA如HBV、HPV的復(fù)制量，為臨床診斷提供有力的量化指標(biāo)依據(jù)。
     SNPs篩選
SNPs是指人類基因組中普遍存在的個(gè)體之間相互區(qū)別的堿基變化位點(diǎn)，稱作單核苷酸多態(tài)性（Single nucleotide polymorphisms）。人們普遍認(rèn)為，SNPs是人類個(gè)體之間相互區(qū)別的原因，也和多種**發(fā)生、變化相聯(lián)系。長(zhǎng)期以來，SNPs位點(diǎn)的快速篩選需要大量的基因分型工作，花費(fèi)巨大，是工作進(jìn)展的*大障礙。現(xiàn)在，研究者可以采用熒光偏振為基礎(chǔ)的FP-TDI技術(shù)（fluorescence polarization template-directed dye-terminator incorporation）進(jìn)行高通量單核苷酸多態(tài)分型，操作簡(jiǎn)單，投入少。
實(shí)驗(yàn)過程中先通過PCR獲得含有SNP位點(diǎn)的一條擴(kuò)增產(chǎn)物，針對(duì)這條含有SNP興趣位點(diǎn)的序列設(shè)計(jì)一條寡核苷酸探針，在DNA聚合酶和熒光標(biāo)記的ddNTP存在下，探針單堿基延伸。特定的ddNTP將結(jié)合到靶序列的SNP位點(diǎn)，并造成延伸反應(yīng)的終止。自由的標(biāo)記有熒光的ddNTP比結(jié)合到靶序列的ddNTP體積小，在液體環(huán)境中旋轉(zhuǎn)速度快，激發(fā)的偏振光的偏振值也小，而后者當(dāng)ddNTP加到序列上后，有效分子體積變大，受偏振光激發(fā)后發(fā)出的偏振值高。因此，熒光偏振現(xiàn)象可以應(yīng)用在鑒別ddNTP的結(jié)合位點(diǎn)和基因分型。